物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)(ORT)是一種常用的行為測定法，用于研究小鼠學(xué)習(xí)和記憶的各個(gè)方面。ORT相當(dāng)簡單，可以在3天內(nèi)完成:適應(yīng)日、訓(xùn)練日和測試日。在訓(xùn)練過程中，允許小鼠探索兩個(gè)相同的物體。在測試日，其中一個(gè)物體被替換為一個(gè)新物體。因?yàn)槔鲜筇焐鷮?duì)新奇事物有偏好，如果老鼠識(shí)別出熟悉的物體，它會(huì)把大部分時(shí)間花在新奇的物體上。由于這種與生俱來的偏好，不需要積極或消極的強(qiáng)化或長時(shí)間的訓(xùn)練計(jì)劃。

此外，ORT也可以針對(duì)多種應(yīng)用進(jìn)行修改。可以縮短保留間隔時(shí)間來檢查短期記憶，也可以延長保留間隔時(shí)間來探查長期記憶。可以在訓(xùn)練前、訓(xùn)練后或回憶前的不同時(shí)間使用藥物干預(yù)來研究學(xué)習(xí)的不同階段(即獲得、早期或晚期鞏固或回憶)。總體而言，ORT是一種相對(duì)低壓力、有效的小鼠記憶測試，適用于檢測藥理學(xué)、生物學(xué)或遺傳學(xué)操作后的神經(jīng)心理變化。

實(shí)驗(yàn)介紹

物體識(shí)別試驗(yàn)(ORT)又稱新型物體識(shí)別試驗(yàn)(NOR)，是檢測小鼠學(xué)習(xí)記憶不同階段的一種相對(duì)快速有效的手段。最初由Ennaceur和Delacour在1988年描述，主要用于大鼠。然而，從那時(shí)起，它已成功地適用于小鼠。該測試只依賴于三個(gè)階段:一個(gè)習(xí)慣化階段，一個(gè)培訓(xùn)階段和一個(gè)測試階段。訓(xùn)練僅僅涉及對(duì)兩個(gè)相同物體的視覺探索，而測試階段則涉及用一個(gè)新的物體替換先前探索過的物體。因?yàn)閲X動(dòng)物有一種天生的對(duì)新奇事物的偏好，一只記得熟悉的物體的嚙齒動(dòng)物會(huì)花更多的時(shí)間探索新奇的物體。

與其他嚙齒動(dòng)物記憶測試相比，ORT的主要優(yōu)勢在于它依靠嚙齒動(dòng)物的自然傾向來探索新奇事物。因此，不需要大量的培訓(xùn)課程或任何積極或消極的強(qiáng)化來激勵(lì)行為。這意味著相對(duì)于其他測試，ORT的壓力要小得多，并且比其他常用的記憶測試(如Morris水迷宮或Barnes迷宮)需要的運(yùn)行時(shí)間短得多，這兩種測試都需要一周或更長時(shí)間。因此，口服體液補(bǔ)充療法的條件與研究人類認(rèn)知所用的條件更相似，這增加了該試驗(yàn)相對(duì)于許多其他嚙齒動(dòng)物記憶試驗(yàn)的生態(tài)有效性。

同樣，由于ORT是一項(xiàng)簡單的視覺回憶任務(wù)，因此它已成功地適用于包括人類和非人靈長類在內(nèi)的許多物種，以評(píng)估陳述性記憶的不同種間方面。最后，可以很容易地修改ORT，以檢查學(xué)習(xí)和記憶的不同階段(即獲得、鞏固或回憶)，評(píng)估不同類型的記憶(如空間記憶)，或評(píng)估不同的記憶保持間隔(即短期記憶與長期記憶)。

實(shí)驗(yàn)揭秘

如何選擇合適的物體？

• 選擇不同的物體，以便于動(dòng)物識(shí)別，但具有相似的復(fù)雜程度(紋理、形狀、顏色模式和亮度等)。有效地減少任何可能影響結(jié)果的潛在誘發(fā)的物體偏好。 

• 使用與老鼠大小接近或稍大一點(diǎn)的物體來鼓勵(lì)探索(圖1)。為了減少誘發(fā)的偏好，確保小鼠能夠在兩個(gè)物體上或兩個(gè)物體都不能攀登，盡管攀登物體的能力可能會(huì)增加探索的興趣(僅僅坐在物體上的時(shí)間不計(jì)入探索時(shí)間)。

• 每個(gè)物體至少有2個(gè)相同的。為了在測試過程中最大限度地減少潛在的氣味線索，事實(shí)上每個(gè)物體建議要有3個(gè)，一個(gè)用于訓(xùn)練，一個(gè)用于測試，一個(gè)用于更換除味。
  

• 使用由不易碎材料制成的物體，因?yàn)樵趯?shí)驗(yàn)過程中由于損壞而丟失物體可能會(huì)干擾測試的連續(xù)性，并可能對(duì)動(dòng)物造成傷害或傷害。

• 在使用前和使用之間*清潔物體。

實(shí)驗(yàn)光線

為了盡量減少明亮照明的壓力，請(qǐng)使用漫反射、低照明，迷宮中心的照明度約為 20 勒克斯。使用類似于常規(guī)住房條件的溫度和濕度。如果將老鼠從一個(gè)房間搬到另一個(gè)房間進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)?jiān)诿刻焓褂们白尷鲜筮m應(yīng)新房間至少 1 小時(shí)。

實(shí)驗(yàn)預(yù)處理

在訓(xùn)練前將老鼠處理好。由于該試驗(yàn)依賴于嚙齒動(dòng)物探索新奇事物的自然傾向，因此可減少處理過程中可能會(huì)干擾其探索競技場以及隨后探索物體的區(qū)域的任何壓力或焦慮。理想情況下，每天處理小鼠1 - 2次，至少1分鐘，試驗(yàn)前1-2周。

實(shí)驗(yàn)步驟

• 在訓(xùn)練日，在對(duì)角線上放置 2 個(gè)相同的物體（即一個(gè)在 NW 角，一個(gè)在 SE 角）。如果物體太輕并且可以被老鼠移動(dòng)，需要將它們固定在地板上。

• 在測試日，使用每個(gè)物體的第三個(gè)副本，將一個(gè)熟悉的物體和一個(gè)新奇的物體放置在與訓(xùn)練日相同的對(duì)角線上(圖2)。

  
  

Tip：對(duì)于實(shí)驗(yàn)測試箱，使用由白色或黑色無孔塑料制成的方形室(約40 cm x 40 cm x 40 cm)，與小鼠的顏色形成對(duì)比。或者，使用圓形開放場平衡每組物體的使用，這樣每一個(gè)物體都可以作為一個(gè)熟悉的物體和一個(gè)新奇的物體使用。此外，平衡新物體的位置到競技場的4個(gè)角落。確保記錄哪只對(duì)角線用于哪只動(dòng)物，以便訓(xùn)練日使用的對(duì)角線與測試日每只小鼠使用的對(duì)角線相同。

• 將相機(jī)直接放在設(shè)備的上方，以獲得最佳的探索視野。可使用具有鼻點(diǎn)檢測功能的VisuTrack軟件進(jìn)行準(zhǔn)確分析。如果使用軟件，請(qǐng)?jiān)陂_始之前捕獲已放置對(duì)象的背景圖像。在軟件中，將探索區(qū)域設(shè)置為對(duì)象周圍大約 2-3 cm。

• 在實(shí)驗(yàn)過程中，請(qǐng)確保實(shí)驗(yàn)者距離實(shí)驗(yàn)箱1米以上，并且老鼠不可見。注意：任何時(shí)候老鼠坐在物體上而沒有主動(dòng)的觸須掃描或嗅探都不算作探索時(shí)間。

數(shù)據(jù)分析

• 在訓(xùn)練(T1)和測試(T2)期間，計(jì)算每個(gè)會(huì)話中兩個(gè)對(duì)象的總探索時(shí)間(e1和e2)。大多數(shù)小鼠應(yīng)在5分鐘前達(dá)到兩個(gè)物體20秒的最小探測總數(shù)。

• 對(duì)于探索性低且不符合此標(biāo)準(zhǔn)的小鼠品系，將T1和T2時(shí)間延長至10 min，延長5 min，如試點(diǎn)測試期間所觀察到的。 

• 對(duì)行為評(píng)分5分鐘或超過5分鐘，直至達(dá)到20秒的標(biāo)準(zhǔn)。 

• 如果小鼠在10分鐘內(nèi)對(duì)T1或T2兩個(gè)物體的探索未達(dá)到20秒的最小值，則排除在分析之外，因?yàn)闊o法確認(rèn)它們是否花費(fèi)了足夠的探索時(shí)間來學(xué)習(xí)/辨別。